共沉淀,共沉淀法原理

今天主要跟大家谈谈一些关于共沉淀，和共沉淀法原理对应的一些知识点，希望能帮助到大家。

原刊号一起实验网

如果您对以下分析方法感兴趣或者没有任何研究想法，请积极讨论！

一起实验网络——专业服务于生物医学研究行业。

个性化的医学生信息解决方案，包括全方位服务的生物信息学、测序、验证和高分科学

生物信息数据挖掘、生物信息图谱、SCI思路设计、投稿指导、生物信息分析课程

1用预冷的PBS清洗细胞3次。

2添加免疫共沉淀裂解物，置于4C摇床上，摇动30分钟。

3用枪头移液收集蛋白质，12000xg、4C离心10分钟，收集蛋白质上清液。

4将5L一抗添加到每个样品的EP管中。

5.将蛋白上清转移至相应的EP管中，每管12mL。

6.置于4C下并通过3D旋转摇动过夜。

7收集附着在凝胶珠上的蛋白质A/G，并为每个样品取30L。

8用免疫共沉淀裂解液清洗ProteinA/G微珠，每次1mL，10002000xg，4C，1分钟，离心，弃上清。重复此操作3次。

9添加适当体积的裂解液以重悬ProteinA/G凝胶珠。

10置于4C下并通过3D旋转摇动4-8小时。

11制备免疫沉淀清洗液并用PBS将免疫共沉淀裂解液稀释一半。

121000-2000g、4离心1分钟，除去上清液。

13向每个管中加入1mL免疫沉淀洗涤液，重悬，上下颠倒洗涤，在4C下以10002000xg离心1分钟，然后除去上清液。重复此操作5次。

加入80-100L含有14DTT的2X上样缓冲液，轻弹混匀，在98C水浴中煮沸5分钟。

15每个样品取20L，通过Westernblot检测相应的蛋白。

对于共沉淀和共沉淀法原理的题，你还有哪里不知道的？，希望对大家有帮助!